高压蒸汽霉菌锅可分为立式、卧式和手提式等多种类型，因为高压蒸汽灭菌器具有高温高压的特性，使用时具有潜在的危险性，所以使用的时候都要严格遵守操作规程。下面上海三申就以立式的高压蒸汽锅为例介绍具体操作的方法：希望对高压蒸汽灭菌锅的操作人员具有一定的帮助。
（1）打开高压蒸汽灭菌器的进水阀，向漏斗中加水，或者也可以打开锅盖向灭菌锅内加水，当水达到水位标记高度时停止加水，并关闭高压蒸汽灭菌器的进水阀门。
（2）打开高压蒸汽灭菌器的排气口，装入待灭菌物品，但不要放得太挤，以免影响蒸汽流通，造成灭菌不彻底的现象；
（3）盖好锅盖，以对角线均匀逐一拧紧螺丝，这样使立式压力蒸汽灭菌器密闭起来，工作效率更高。当高压蒸汽灭菌器内温度升高，锅内充满了水蒸气，冷空气就从排气囗排出；
（4）待冷空气排尽后，关闭上海三申压力蒸汽灭菌器的排气囗。
（5）当压力表显示出所需压力时，调节高压蒸汽灭菌锅的火力，使内压力保持稳定，记下灭菌开始时间，维持压力至规定时间后熄火或断电，使其自然降压；
（6）高压蒸汽灭菌器灭菌完毕后，应使锅内压力缓慢下降至0.05兆帕以下，方可打开高压灭菌锅的放气阀，否则由于锅内突然减压，会引起培养基和其它液体从容器内喷出，或沾湿棉塞，导致杂菌污染或塑料袋胀破造成损失；当压力表指示下降到0.05兆帕时，打开放气阀缓慢放气。待压力下降至零时，方能打开锅盖，取出灭菌物；压力表指针未降到零时，不能打开锅门，以防被灭菌物破裂喷出伤人；
（7）如果需要连续使用高压蒸汽灭菌锅，则需要注意及时补充高压灭菌器锅内的水量。使用完毕，立即打开出高压蒸汽灭菌器的水阀和冷凝出水口，放尽锅内的余水，使锅内保待干燥，以防日久生锈。
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